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液相色譜柱使用前應該如何維護?

 一、使用前準備
 
1、使用前認真閱讀色譜柱的說明書,了解色譜柱的種類,選用合適的色譜柱。
在選用色譜柱時,應充分考慮所分析樣品的極性大小、化合物的種類數量、結構特征。根據化合物的性質,選擇合適的色譜柱和分析條件。不同類型的色譜柱使用的流動相不同,使用錯誤的流動相會降低柱效,損傷柱子。如分析極性較大的多糖類成分,應當采用親水性的反相填料。對于首次使用的色譜柱,還應按照廠家的出廠說明對色譜柱進行低流速的沖洗活化,活化后的色譜填料共價鍵鍵合力增強,柱效提高,壽命延長。
 
2、樣品的準備與預處理
我們的經驗是樣品純化得越干凈,色譜柱的使用壽命越長。許多樣品,尤其是生物樣品,組份非常復雜,對色譜柱的損傷性較大,不經預處理的樣品直接分析,會嚴重縮短色譜柱的使用壽命。因此,在樣品的準備時需對樣品進行預處理,包括準備溶劑的選擇、樣品過濾等。
 
2.1 制樣溶劑的選擇
制樣溶劑通常需要考慮樣品的溶解性、與流動相的相溶性、色譜填料的適用性等方面。這類溶劑需對樣品有較大的溶解性,而且與流動相溶,洗脫強度最好低于流動相或梯度洗脫中的起始流動相,以免影響樣品分離。目前許多手性色譜柱都禁止使用DMSO、四氫呋喃、氯仿等溶解樣品,這些溶劑會破壞固定相的結構,從而縮短色譜柱的使用壽命。此外,制樣溶劑還應與色譜系統(tǒng)其他部件如高壓泵、進樣器等相適用。
 
2.2 制樣溶劑過濾
在進樣前需過濾樣品溶液,如采用0.22μm的微孔濾膜除去不溶性微粒,以免堵塞柱頭濾片及柱內填充床。在條件允許的情況下,最好采用與色譜柱同種填料的固相萃取柱過濾進樣溶液,可以減少在色譜柱上死吸附的物質或易堵塞的大分子樣品。如生物樣品中的小極性的油脂類易于沉淀死吸附在C18反相色譜柱中,導致柱效降低、柱壓升高。采用SPE柱過濾后,可以有效減少在色譜柱中附著沉積的死吸附成分,保護色譜柱不被污染,保證其使用壽命。
 
 
2.3 其他,如溶液濃度、進樣量等
分析物的某些性質同樣能影響色譜柱的使用壽命。強酸、強堿性物質和蛋白質類生物大分子,它們能與固定相填料作用,或生成不可逆吸附層,改變填料表面特征,使色譜柱性能發(fā)生變化,最終導致分離失效。此外樣品的進樣量過大、超載都會影響色譜柱的分離性能和使用壽命。
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